زمینة مطالعه: کلستریدیوم سپتیکوم عامل ایجاد بیماری های حاد متعددی در انسان و حیوانات است. آلفاتوکسین مهمترین فاکتور بیماریزایی کلستریدیوم سپتیکوم است و فعالیتهای همولیتیکی، نکروتیکی و کشندگی دارد. هدف: درمطالعه حاضر، خالص سازی آلفاتوکسین سویه بومی کلستریدیوم سپتیکوم NH2 و تهیه آنتی بادی علیه آن انجام شده که می تواند در تهیه کیت های تشخیصی، آزمون توانایی واکسن و موارد مرتبط مورد استفاده قرار گیرد. روش کار: سویه بومی کلستریدیوم سپتیکوم NH2 در محیط جگر کشت داده شد. آلفاتوکسین مترشحه در محیط کشت، طی سه مرحله خالص سازی شد: رسوب دادن با آمونیوم سولفات 25 و 60 % اشباع، کروماتوگرافی تغییر یونی با ستون DEAE-Sephadex و ژل فیلتراسیون بر روی SephadexG-50. در تمامی مراحل میزان آلفا توکسین مورد اندازه گیری قرار گرفت و روش خالص سازی با SDS-PAGE ارزیابی شد. متعاقب ایمن سازی خرگوش با آلفاتوکسین و تهیه سرم از حیوان، ایمونوگلوبین با یک فرایند سه مرحله ای خالص شد: آمونیوم سولفات، کروماتوگرافی تغییر یونی و ژل فیلتراسیون. عملیات مسیر خالص سازی آنتی بادی به وسیله آزمون های الکتروفورز، ایمونودیفیوژن دوطرفه و شعاعی یکطرفه(SRID)، وسترن بلات و SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت. نتایج: مراحل خالص سازی که با آمونیوم سولفات 25% آغاز و با 60% ادامه یافت موجب حذف بسیاری از پروتئین ها گردید. نتایج کروماتوگرافی تعویض یونی با غلظت های مختلف نمک نشان داد که غلظت 0. 4 مولار نمک می تواند از همه بیشتر آلفاتوکسین را از ستون DEAE جدا نماید. آلفاتوکسین در مرحله اول، در محیط کشت باکتری فعالیت مخصوص U/mg 394 را داشت و در نهایت، پس از انجام مراحل خالص سازی فعالیت مخصوصش به U/mg 13666 رسید. روند خالص سازی توانست توکسین را 35 برابر خالص کرده و 47 % توکسین اولیه را تخلیص و بازیابی نماید. نتایج الکتروفورز روی ژل SDS-PAGE حاکی از خلوص حدودی آلفاتوکسین بود. نتایج ایمونودیفیوژن دوطرفه و شعاعی یکطرفه وجود آنتی بادی مربوطه را تایید نمود. در فرایند وسترن بلات، دو زنجیره سبک و سنگین ایمونوگلوبین توسط مرکاپتواتانول از هم جدا شده و در الکتروفورز فقط با پروتئین 48 کیلودالتونی بر روی غشاء نیتروسلولزی واکنش داد. نتیجه گیری نهایی: نتایج این تحقیق منجر به دستیابی به روش خالص سازی آلفاتوکسین کلستریدیوم سپتیکوم و آنتی بادی علیه آن سریعتر و اقتصادی تر از روش های سایر محققین گردید.

اهداف: هدف از انجام این پژوهش، تکثیر و همسانه سازی شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی ژن کشنده آلفا توکسین (α-Toxin) باکتری کلستریدیوم پرفرِینجنس با اندازه های به ترتیب 1100 و 750 جفت باز با استفاده از ناقل بیانی pET28a در باکتری E. coli بود. مواد و روش ها: استخراجDNA ژنومی با استفاده از کیت کیاژن صورت گرفت. آغازگرهای جلوبرنده و برگشت در آزمایشگاه طراحی و در ناحیه ابتدایی آغازگرها ردیف های آنزیم های برشگر HindIII و XhoI مطابق با ناحیه کلونینگ پلاسمید مورد نظر اضافه گردید. قطعات ژنی مورد نظر با روش PCR معمولی تکثیر و در ناقل pET28a با کمک روش شوک حرارتی کلون شدند. استخراج DNA پلاسمیدی با استفاده از روش لیز قلیایی صورت گرفت. نتایج: نتایج ژل الکتروفورز محصولات PCR، تکثیر واضح و واحد شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی قطعات ژنی مورد نظر را مطابق با اندازه های مورد انتظار نشان داد. بعلاوه با استفاده از آزمایش هضم آنزیمی منفرد و دوگانه توسط آنزیم های برشگر HindIII و XhoI همسانه سازی ژنهای آلفا توکسین در باکتری میزبان و تولید باکتریهای نوترکیب تأیید شد. نتیجه گیری: با توجه به موفقیت آمیز بودن دقیق کلونینگ ژنهای آلفا توکسین در باکتری های بیانی میزبان، می توان گفت که پرایمرهای طراحی شده در این تحقیق برای تکثیر ژن آلفا توکسین بسیار اختصاصی بوده و به عنوان مارکر شناسایی و طبقه بندی این باکتری ها می توانند استفاده واقع شوند. همچنین با ساخت احتمالی واکسن های نوترکیب ژنتیکی مهندسی شده می توان کنترل و مقابله با پاتوژن های مهمی همچون باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس را امکان پذیر ساخت.

هدف: استافیلوکوکوس اورئوس دومین عامل رایج ایجاد کننده عفونت های بیمارستانی است. این باکتری می تواند از طریق انتقال عمودی و افقی ژن های مقاومت زا را جابه جا نماید. هدف از این مطالعه، بررسی فراوانی مقاومت آنتی بیوتیکی، فراوانی ژن هایpvl[1]و[2]hla که در جزایر بیماری-زایی(SaPIs)[3] قرار گرفته اند و روابط معنی دار بین آن ها است. مواد و. روش ها: در این مطالعه ﻣ ﻘ ﻄ ﻌ ﯽ-ﺗ ﻮ ﺻ ﯿ ﻔ ﯽ طی 3 ماه 107 نمونه باکتری های گرم مثبت مشکوک به جنس استافیلوکوک از بیماران مبتلا به عفونت مجاری ادراری جمع آوری شد. از تست های فنوتیپی و پرایمرهای اختصاصی ژن16S rRNA و ژنcoa با استفاده از روش مولکولی PCR، برای جداسازی جنس و گونه استافیلوکوکوس استفاده گردید. سپس فراوانی ژن های hla و pvlبا استفاده از پرایمرهای اختصاصیدر جدایه-های استافیلوکوکوس اورئوسمورد ارزیابی قرار گرفتند. حساسیت آنتی بیوتیکیاستافیلوکوکوس اورئوس ها جدا شده به13آنتی بیوتیک مختلف از طریق روش دیسک دیفیوژن و بر اساس جداول CLSI مورد بررسی گرفت و در آخر برای سویه های مقاوم به متی سیلین تست MIC گذاشته شد. نتایج: باتوجه به تست های فنوتیپی و ژنوتیپی، 50 جدایه به عنوان استافیلوکوکوس اورئوس تشخیص داده شد. نتایج تست آنتی بیوگرام نشان داد که بیش-ترین مقاومت نسبت به آنتی بیوتیک های پنی سیلین (%100) و متی سیلین (%100) و کم ترین مقاوت نسبت به آنتی بیوتیک های جنتامایسین (%5) و ایمی پنم (%4) بوده است. نتایج تست MIC نشان داد که مقدار تأثیرگذار آنتی بیوتیک متی سیلین به بیش ازμ l/m l8 افزایش پیدا کرده است که این مقدار 4 برابر بیش از حد استاندارد است. مطالعه نتایج مقاومت آنتی بیوتیکی نشان داد که همه جدایه های استافیلوکوکوس اورئوسجزء گروه MDRهستند. هم-چنین نتایج PCRنشان داد که 94% جدایه ها حامل ژن hla و 20% نیز حامل ژنpvl هستند. بحث: نتایج حاصل از این تحقیق افزایش بیش از حد مقاومت آنتی بیوتیکی را دربین سویه های استافیلوکوکوس اورئوس جدا شده از مجاری ادراری نشان می دهد. همراهی ژن های موجود در جزایر بیماری زایی هم چون hla و pvl می تواند بر وخامت موضوع افزوده و درمان عفونت این گونه باکتریایی را با دشواری روبرو نماید.

زمینه مطالعه: زهر عقرب Mesobuthus eupeus شامل پپتید توکسین هایی است که برخی از آن ها در عملکرد کانال های پتاسیمی دخالت دارند. این نقش می تواند تأثیر مهمی در مطالعات فارماکولوژی و فیزیولوژی این کانال ها ایفا کند. هدف: با توجه به نبود اطلاعات کافی از بیولوژی مولکولی پپتید های زهر عقرب ایرانی، هدف کلی ما در این پژوهش افزوده سازی و آنالیز توالی cDNA کد کننده یک پپتید توکسین از غده زهر عقرب Mesobuthus eupeus استان خوزستان می باشد. روش کار: به منظور ساخت cDNA، مجموع کل RNA از غده زهر عقرب Mesobuthus eupeus استان خوزستان جداسازی شد و به کمک آن ساخت cDNA صورت گرفت. در ادامه با بکارگیری تکنیک Semi-Nested RT-PCR افزوده سازی cDNA هدف انجام گرفت و قطعه نوکلئوتیدی 227bp توالی یابی شد. نتایج: این قطعه شامل یک توالی کد کننده پپتید توکسین به اندازه 174 نوکلئوتید است که پروتئینی را به میزان 57 اسیدآمینه، وزن مولکولی 6.434KD و نقطه ایزوالکتریک 5.12 را کد می کند. آنالیز توالی اسیدآمینه ای این پروتئین، پپتید راهنما، پیش پروتئین و پروتئین بالغی بطول بترتیب 19، 4 و 34 اسید آمینه را مشخص می کند. با همترازی این پپتید توکسین با دامین های مربوط به توکسین دیگر عقرب ها، معلوم شد که این پپتید به سوپر فامیلی توکسین- 6 تعلق دارد. نتیجه گیری نهایی: با توجه به بیشترین شباهت این پپتید توکسین با آلفا نوروتوکسین-1Mesobuthus eupeus آسیایی، می توان چنین نتیجه گرفت که این توکسین احیانا عضو دیگری از آلفا توکسین هاست که متعلق به عقرب Mesobuthus eupeus بومی استان خوزستان است.