هدف: تعیین غیرتهاجمی جنسیت جنین انسان بااستفاده از روش NESTED-PCR، از طریق خون مادران باردار در 8 تا 12 هفته بارداری. مواد و روشها: در مرحله اول مخلوطی از نمونه های خون افراد سالم مذکر و مونث به کار برده شد. بر روی این نمونه ها روش استخراج DNA و به دنبال آن روش PCR بهینه سازی گردید. سپس با کسب رضایت مادران باردار، در 8 تا 12 هفته بارداری، از آنان نمونه خون تهیه گردید. از سرم و پلاسما و گلبولهای سفید این نمونه ها، DNA استخراج و بر روی آنها روش NESTED-PCR انجام گردید. در دور اول PCR این روش، با به کارگیری پرایمرهای خارجی ژن مخصوص کروموزوم Y یا ژن تعیین کننده جنسیت (SRY: Sex determining Region Y) Y، قطعه 472 جفت بازی و در دور دوم PCR، قطعه 254 جفت بازی DNA تکثیر یافت که حاکی از وجود جنین مذکر بود.یافته ها: در این مطالعه 70 نمونه خون مادران آنالیز گردید و فقط 32 مورد از زایمانها پیگیری و معلوم شد که 18 مورد از نوزادان متولد شده مذکر بوده است. نتایج این پژوهش نیز نشان داد که در نمونه های سرم، 21 مورد (3 مورد خطا) و در نمونه های گلبولهای سفید خون، 22 مورد (4 مورد خطا) مذکر تشخیص داده شده بودند. به عبارت دیگر در مورد نمونه های سرم نتایج به میزان 62/90 درصد و در گلبولهای سفید خون به میزان 25/81 درصد موفقیت آمیز بوده است که نزدیک به کارهای دیگران (5/91درصد) است. در این پژوهش از به کارگیری DNA آزاد پلاسما نتیجه مطلوبی حاصل نگشت.نتیجه گیری: صحت بیشتر این نتایج زمانی معلوم می گشت که امکان دست یابی به تمام این مادران وجود داشت. با این حال، این پژوهش نشان داد که سرم خون این مادران، منبع مناسبی برای تعیین جنسیت جنین است و می تواند در بررسیهای دیگر مربوط به تشخیص بیماریهای ژنتیکی قبل از تولد مورد توجه قرار گیرد.

ویروس لکوز گاو (BLV) رترو ویروسی است که موجب لکوز یا لمفومای مزمن گاو در بسیاری از کشورهای جهان می شود. الیزا اولین روش تشخیصی برای غربالگری حضور پادتن ها بر علیه ویروس لکوز گاوی است. تاکنون روشن نشده است که آیا این روش پادتن ها را در زمان آلودگی به ویروس لوسمی گاو شناسایی می کند یا خیر. واکنش زنجیره ای پلی مراز (PCR) برای توالی های اختصاصی DNA پروویروس هدف، در سلول های تک هسته ای خون محیطی (PBML) استفاده شده است. به منظور یافتن روشی حساس و کارا برای تشخیص آلودگی به ویروس BLV در نمونه های خون و بافت ها یا محتواهای مختلف، روش آشیانه ای واکنش زنجیره ای پلی مراز (NESTED-PCR) بر اساس شناسایی ژن BLV-gag طراحی گردید. آزمون آشیانه ای PCR بر روی نمونه های اخذ شده از گاوهایی که به صورت طبیعی آلوده شده اند (281 نمونه)، نمونه های بافتی پارافینی (3 نمونه) و DNA تخریب شده (10 نمونه عقده لمفاوی سونیکه) انجام شد. حساسیت و ویژگی آزمون PCR به ترتیب 0.85 و 0.84 محاسبه گردید. درجه توافق بین دو آزمون (کاپا) مقدار 0.693 محاسبه گردید که قابل توجه است. ارزش پیشگویی مثبت آزمون (دقت) 0.82 و ارزش پیشگویی منفی آن 0.86 بود. در نهایت صحت آزمون 0.85 محاسبه شد. این مطالعه نشان داد که روش واکنش زنجیره ای پلی مراز آشیانه ای در مقایسه با روش های PCR معمولی استفاده شده در آزمایش های متفاوت از حساسیت بیشتری برخوردار است. این تکنیک برای غربالگری انبوه و همچنین تشخیص DNA پروویروس در نمونه های بافتی خاص اعم از پارافینه یا نمونه های قدیمی مفید خواهد بود.

مقدمه: تعیین جنسیت گذشته از این که از نظر والدین دارای ارزش خاصی است، در بیماریهای وابسته به جنس نیز از اهمیت زیادی برخوردار است. هدف از این مطالعه تعیین جنسیت جنین در موارد مشکوک به بیماریهای مغلوب وابسته به X در سه ماهه اول بارداری به روش مولکولی بود.مواد و روشها: بعد از جمع آوری 74 نمونه از پرزهای کوریونیک (CV) و جدا کردن آنها از نمونه های مادری،DNA  آنها استخراج شد و پس از انجام واکنش زنجیره ای پلیمر از (PCR)، جنسیت آنها تعیین شد. هم چنین بعد از افزایش حساسیت، سیستم قادر به تعیین جنسیت یک سلول بیوپسی شده از جنین بود، آنالیز آماری با استفاده از آزمون دقیق فیشر انجام گرفت.یافته ها: جنسیت نمونه های CV به وسیله PCR تعیین شد. نتایج آن تعداد از نمونه هایی که موفق به ارتباط با خانواده های آنها شدیم، با جنسیت جنینهای متولد شده یکسان بود (P<0.001). بعد از افزایش حساسیت سیستم، جنسیت 13 نمونه جنینی که در مراحل مختلف سلولی بودند تعیین شد. هم چنین جنسیت دو نمونه تخمک لقاح نیافته (سلول هاپلوئید) و یک تخمک بارور شده؛ ولی تقسیم نشده (سلول دیپلوئید)، تعیین شد.نتیجه گیری: تعیین جنسیت جنین قبل از تولد در سه ماهه اول بارداری، از تولد کودکان بیمار جلوگیری کرده و هم چنین از ارتباط عاطفی مادر با جنین در موارد سقط می کاهد. هم چنین در موارد لقاح آزمایشگاهی (IVF) با شناسایی جنس جنین و انتقال جنین مونث به مادر در بیماریهای مغلوب وابسته به جنس می تواند کاربرد داشته باشد. کاربرد دیگر آن در کنترل جمعیت جوامع در مواردی است که زوجها تمایل به داشتن جنس خاصی از کودک را دارند. سیستم مولکولی اپتیمایز شده فوق که بر اساس ژن آمیلوژنین طراحی گردید، می تواند جنسیت را در نمونه های خون، CV و در مرحله تک سلولی IVF با حساسیت و ویژگی بالا تعیین نماید.

سابقه و هدف: بروز عوامل عفونی جدید احتمال انتقال عفونت از طریق خون را افزایش داده و بالا بردن ایمنی خون را تهدید می نماید. علیرغم وجود روش های جدید تشخیص هپاتیت، هنوز برخی از موارد هپاتیت ناشناخته است. در سال 1997 ویروس DNA دار جدیـدی از فـرد مبتلا به هپاتیت پس از انتقال خون (Non-A-G) جداسازی شد که امروزه به نام ‏TTV معروف است. این ویروس حلقوی تک رشته ای بدون پوشش و مقاوم به فرآیندهای ویروس کشی، اولین سیرکو ویروس انسانی بوده و دارای شیوع جهانی است. ویروس در ایجاد هپاتیت و آنمی آپلاستیک، نقش دارد. مطالعه حاضر با هدف تعیین میزان شیوع ویروس TT در اهداکنندگان سالم خون شهر اهواز و راه اندازی روش مولکولی PCR - N22 جهت مطالعات بعدی ویروس انجام شد. مواد و روش ها: مطالعه انجام شده از نوع توصیفی بود و جامعه مورد مطالعه، اهداکنندگان خون از نظر هپاتیت A-C و HIV در سال 1382 در شهر اهواز بودند. 253 اهداکننده خون که آزمون های سرولوژیک هپاتیت های A-C و HIV-Ab آن ها منفی بود، از نظر وجود TTV DNA در پلاسما به روش PCR و با استفاده از آغازگرهای Okamoto مورد مطالعه قرار گرفتند. یافته ها توسط آزمون های کای دو (Chi-square) و دقیق فیشر و نرم افزار آماری 11.5 SPSS مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند.یافته ها: مطابق یافته های این تحقیق شیوع TTV در میان اهداکنندگان خون اهواز در سال 1382، 23.7%(60.253) بود و تفاوت معنی داری میان شیوع ویروس و متغیرهای زمینه ای یافت نشد.نتیجه گیری: نتایج این تحقیق در مقایسه با کشورهای همسایه، شیوع یکسان TTV را نشان می دهد ولی در مقایسه با شیوع TTV در بیماران تالاسمی که هم زمان با این مطالعه انجام شده، تفاوت معنی دار است (56.7%). این امر اهمیت انتقال خون را در گسترش ویروس نشان می دهد.

ترماتودهای خانواده شیستوزوماتیده در عروق خونی انسان و حیوانات زندگی می کنند. انگل ارنیتوبیلارزیا ترکستانیکم یکی از کرمهای خانواده شیستوزوماتیده است که برخی از حیوانات پستاندار را آلوده می کند. با توجه به اینکه اولا محل زندگی میزبانهای واسط گونه های مختلف شیستوزوما در آب های شیرین است و ثانیا از لحاظ شکل ظاهری، سرکر آنها شبیه یکدیگر می باشند، روشهای تشخیصی مطمئن برای شناسایی و تفریق آنها از یکدیگر مورد نیاز می باشد. در این مطالعه یک روش PCR برای تشخیص انگل در حیوانات آلوده تهیه گردیده است. پرایمرهای اختصاصی بر مبنای سکانس منتشر شده این کرم طراحی شده است. ابتدا DNA انگل استخراج و سپس آزمایش PCR بهینه سازی گردید و قطعه ای به طول 724 جفت باز از کرم بالغ تکثیر شد. محصول PCR ابتدا در وکتور pTZ57R/T کلون و سپس تعیین توالی گردید و بدین ترتیب اختصاصی بودن آزمایش مورد تایید قرار گرفت. از تمام بافت های حلزون برای استخراج DNA انگل نیز استفاده شد. برای این منظور از روش NESTED-PCR بکمک یک جفت پرایمر استفاده گردید. در این آزمایش قطعه ای بطول 449 جفت باز تکثیر شد و وجود یک حلزون آلوده در مجموعه ای از حلزون های غیرآلوده تشخیص داده شد. توالی به دست آمده به کمک برنامه بلاست نشان داد که این توالی دارای 682 جفت باز در محصول PCR میباشد. این اطلاعات با شماره AY862391 در بانک ژن قابل دسترسی است. نتایج این مطالعه نشان داد که در کنار سایر روشهای آزمایشگاهی می توان از PCR و NESTED-PCR به عنوان روش های تشخیصی مناسب جهت شناسایی سرکر ارنیتوبیلارزیا ترکستانیکم در نمونه های کلینیکی بهره جست.

در این مطالعه یک روش NESTED-PCR برای تشخیص دو ویروس BVDV از سویه NADL بهینه سازی گردید. در آزمایش RT-PCR، قسمتی از منطقه غیر قابل ترجمه ناحیه '5 ویروس به طول 249 جفت باز تکثیر شد. محصول PCR در وکتورpTZ57R/T کلون گردید و نتیجه تعیین ردیف اسیدهای نوکلوتیدی آن اختصاصی بودن آزمایش را تایید نمود. سپس پرایمرهای داخلی انتخاب و آزمایش NESTED-PCR انجام گردید و یک قطعه DNA به طول 155 جفت باز تکثیر شد. میزان حساسیت آزمایش RT-PCR، 104TCID50 و میزان حساسیت آزمایش NESTED-PCR در تشخیص ویروس BVDV در کشت سلول، 102TCID50 تعیین گردید. تعداد 7 نمونه از کشت های سلولی با سه روش PCR, ELISA و NESTED-PCR مورد آزمایش قرار گرفتند. نتایج نشان داد که حساسیت روش های مولکولی در تشخیص ویروس در نمونه ها نسبت به روش ELISA بیشتر می باشد.