لطفا برای مشاهده متن چکیده به متن کامل (PDF) مراجعه فرمایید.

شیر مادر به عنوان تنها منبع تغذیه در ماه های اول پس از تولد، می تواند عامل مهمی در و توسعه میکروارگانیسم های موجود در روده نوزاد باشد. بنا به اهمیت باکتری های اسیدلاکتیک به خصوص لاکتوباسیل ها در سلامت انسان، شناسایی مولکولی این باکتری ها می تواند گامی موثر در به کارگیری آن ها در محصولات فرا ویژه باشد. هدف از این تحقیق، تشخیص و شناسایی سویه های لاکتوباسیلوس موجود در شیر مادر است. در این مطالعه پس از غنی سازی نمونه های شیر در محیط ام آر اس براث، جداسازی و خالص سازی سویه ها در همان محیط کشت صورت گرفت. پس از بررسی های میکروسکوپی با آزمون های بیوشیمیایی ازجمله تخمیر قند، تولید گاز و آزمون آنتی بیوگرام، خصوصیات اولیه باکتری ها تعیین شد. در نهایت شناسایی مولکولی بر اساس توالی های 16s rRNA و سپس انگشت نگاری ژنومی از طریق REP-PCR انجام شد. باسیل ها و کوکسی های گرم مثبت و کاتالاز منفی شناسایی و بر اساس نمونه و مورفولوژی کلنی کدگذاری گردیدند. در مرحله بعد باکتری هایی که در آزمون های آنتی بیوگرام، تخمیر قند و تولید گاز تفاوت هایی از خود نشان داده بودند برای شناسایی مولکولی انتخاب شدند. در نهایت محصولات PCR توالی یابی شدند و توالی ها در نرم افزار BLAST موردبررسی قرار گرفتند. نتایج توالی یابی با استفاده از سرور Ez Taxon آنالیز شد. نتایج نشان داد که سویه های جداشده از نوع پدیوکوکوس لولی، لاکتوباسیلوس رامنوسوس و لاکتوباسیلوس فرمنتوم بودند. شیر مادران می تواند به عنوان منبعی از اسیدلاکتیک باکتری های پروبیوتیکی موردتوجه باشد که ممکن است نقش مهمی در پیشگیری ابتلا نوزادان به بیماری های عفونی داشته باشد. از طرفی تحقیق حاضر نشان دهنده کارایی انگشت نگاری ژنومی REP-PCR با کمک نشانگر (5 GTG) در بررسی روابط فیلوژنیک و تنوع ژنتیکی باکتری ها می باشد.

آنزیم کوتیناز جزء خانواده آنزیمی سرین هیدرولازها بوده که توانایی هیدرولیز انواع استرها و پلی استرهای کوچک مانند کوتین را دارد. کوتین گیاهان از ترکیبات پلی استری هیدروکسی و اپوکسی اسید چرب تشکیل شده است که در مقابل آب نفوذناپذیر است و تنها باکتری های بیماری زای گیاهی قادر به تجزیه آن هستند. به منظور شناسایی این مقاومت، در ابتدا میوه های خیار (Cucumis sativus-'C. sativus')، سیب زرد (Golden Delicious apple 'Malus domestica')، سیب قرمز (Red Delicious apple 'Malus domestica') و گوجه فرنگی (Solanum lycopersicum Mill. Commun' S. lycopersicum') تهیه و از پوست این میوه ها به روش کلرفرم متانول، کوتین استخراج و میزان آن در این میوه ها مقایسه شد. سپس، با استفاده از محیط کشتی اختصاصی حاوی کوتین و سنجش فعالیت آنزیمی، جداسازی سویه های تولیدکننده آنزیم انجام شد. از نمونه های غربال شده،DNA استخراج شد و واکنش PCR به کمک پرایمرهای یونیورسال بر اساس 16s DNA جهت شناسایی نمونه ها انجام گرفت. در ادامه مطالعات بیوانفورماتیک، شناسایی و ثبت نمونه ها در ژن بانک انجام شد. نتایج نشان می داد که درصد کوتین استخراج شده در سیب بیشتر است و احتمالا سیب در مقابل آفات و بیماری ها مقاوم تر است. همچنین، شش سویه تولیدکننده آنزیم کوتیناز از جنس Klebsiella و Enterobacter به کمک بررسی فعالیت آنزیمی و محیط کشت اختصاصی حاوی کوتین جداسازی و توالی کدکننده ناحیه 16s DNA این باکتری ها در ژن بانک ثبت شد.

تولید رنگدانه از باکتری ها به علت مقرون به صرفه بودن، محصول بیشتر و استخراج آسان تر نسبت به سایر منابع از اهمیت خاصی برخوردار است. کاروتنوئید ها، از مهمترین رنگدانه ها با خواص آنتی اکسیدانی، پیش ساز ویتامینA، افزایش دهنده تولید آنتی بادی، ضد تومور و پیشگیری کننده از بیماری های قلبی-عروقی هستند. هدف از این مطالعه جداسازی و شناسایی مولکولی باکتری های تولیدکننده رنگدانه کاروتنوئیدی و آنالیز آن با روش HPLC بود. تعداد 20 نمونه خاک از مناطق مختلف شهر تهران جمع آوری شد. پس از رقت سازی، نمونه ها بر روی محیطBHI آگار کشت و در دمای 37 درجه سانتی گراد گرماگذاری شد. باکتری های تولیدکننده رنگدانه برای شناسایی بیشتر انتخاب و استخراج رنگدانه آنها بوسیله متانول انجام شد. غربالگری باکتری های تولیدکننده رنگدانه در دو سطح انجام گرفت: انتخاب سویه ها با استفاده از رنگ قابل مشاهده؛ آنالیز عصاره ها با طیف سنجی UV-VIS و تایید توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا. (HPLC) ابتدا، جدایه ها با استفاده از روش های فنوتیپی شناسایی شد و ژن 16S rDNA آنها با روش PCR تکثیر و تعیین توالی شد. Staphylococcus epidermidis، Micrococcus aloeverae، Citricoccus alkalitolerans، Rhodococcus zopfii، Arthrobacter agilis، Dietzia natronolimnaea وRhodococcus ruber به عنوان سویه های تولیدکننده کاروتنوئید شناسایی شدند. بالاترین میزان جذب با استفاده از آنالیز طیف سنجی UV-VIS در Staphylococcus epidermidis و Dietzia natronolimnaea مشاهده شد. آنالیز HPLC نشان داد که کاروتنوئیدهای تولید شده در مقایسه با منحنی بتا کاروتن استاندارد، متعلق به بتاکاروتن هستند. میکروارگانیسم ها منبع بالقوه ای برای تولید کارتنوئیدها هستند. در این مطالعه، ما دو جنس باکتری (Staphylococcus epidermidis و Dietzia natronolimnaea) با توانایی بالای تولید کارتنوئید معرفی کردیم.

ارزیابی ویژگی های پروبیوتیکی و ضدقارچی باکتری های اسیدلاکتیک جداشده از انواع خمیرترش به منظور تأمین کشت های میکروبی مورداستفاده در صنایع تخمیری از اهمیت بسزایی برخوردار است. در این پژوهش، باکتری اسیدلاکتیک غالب با تکرار فرایند مایه گیری از خمیرترش جو دوسر، جداسازی و با استفاده از (Polymerase chain reaction) PCR شناسایی گردید. سپس ویژگی های پروبیوتیکی و همچنین اثر ضدقارچی این جدایه لاکتیکی روی آسپرژیلوس نایجر (Aspergillus niger) مورد مطالعه قرار گرفت. توالی یابی محصولات PCR منجر به شناسایی پدیوکوکوس پنتازاسئوس (Pediococcus pentosaceus) به عنوان جدایه لاکتیکی غالب خمیرترش جو دوسر شد. نرخ زندهمانی جدایه مذکور پس از تیمار متوالی اسید و صفرا در مقایسه با نمونه شاهد 80/59 درصد بود. همچنین اثر ضدباکتریایی آن در برابر باسیلوس سرئوس (Bacillus cereus) نسبت به سایر عوامل بیماری زای موردمطالعه به شکل معنی داری (p<0. 05) بیشتر بود. روماند خام فاقد سلول (Crude cell-free supernatant) جدایه لاکتیکی نیز به طور کامل از رشد باسیلوس سرئوس ممانعت نمود اما رشد سالمونلا انتریکا (Salmonella enterica) را 65/68 درصد کاهش داد. بااین حال، روماند فاقد سلول (Cell-free supernatant) خنثی شده جدایه لاکتیکی، اثر بازدارنده ای روی این باکتری ها نداشت. علاوه بر این، جدایه لاکتیکی از قابلیت دگر اتصالی (Co-aggregation) مناسبی با اشریشیا کولای (Escherichia coli) برخوردار بود و به آنتی بیوتیک-های استرپتومایسین، سیپروفلوکساسین، نالیدیکسیک اسید و ونکومایسین، مقاومت نشان داد. این جدایه لاکتیکی، فاقد فعالیت همولیتیکی بود و اثر ضدقارچی آن در برابر آسپرژیلوس نایجر نیز مورد تأیید قرار گرفت. بر این اساس، جدایه پدیوکوکوس پنتازاسئوس از قابلیت مناسبی برای استفاده به عنوان کشت پروبیوتیک و یا نگه دارنده در صنایع تخمیری برخوردار می باشد.

باکتری های اسیدلاکتیک از 9 نمونه شیر تخمیری شتر، چال، جمع آوری شده از مناطق روستایی و سوپرمارکت ها بر اساس خصوصیات موفولوژیکی و فیزیولوژیکی شناسایی شدند.نتایج نشان داد که pH نمونه ها بین 3.8 تا 4.5 قرار داشت. 93 عدد باکتری اسیدلاکتیک از نمونه ها شناسایی شدند که شامل 64 عدد Bacillus ( 68.8درصد)، 8 عدد کوکسی (8.6 درصد)، 11 عدد Coccobacillus (11.83 درصد)، 2 عددStreptococcus  (2.15 درصد) و 8 عدد تتراد (8.6 درصد) بودند. در بین لاکتوباسیلوسها، Lactobacillus plantarum (13 درصد) و در بین اشکال کوکسی، گونه های مختلفLeuconostoc  (13 درصد) غالب بودند. همه جدایه ها به جز Lactobacillus kefir Lactobacillus viridescens, و Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus گالاکتوز را تخمیر کردند. نتایج نشان داد همه جدایه ها در 37 درجه سانتی گراد به صورت هوازی رشد کردند و فقط گونه های شناسایی شده به عنوان Leuconostoc mesenteroides sub sp. cremoris و Leuconostoc paramesenteroides قادر به رشد در 30 درجه سانتی گراد نبودند. هیچ یک از جدایه ها قادر به تخمیر گلیسرول نبودند. در بین همه جدایه ها فقط Lactobacillus helveticus و Leuconostoc mesenteroides قادر به رشد در حضور 2 درصد کلرید سدیم نبودند. بعضی از باکتری های اسیدلاکتیک جدا شده از چال مانند Lactobacillus fermentum، Lactobacillus reuteri، Streptococcus thermophilus، Lactobacillus helveticus، Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus، Lactobacillus plantarum، Lactobacillus hilgardii، Lactobacillus casei subsp. Paracesei، Lactobacillus casei subsp rhamnosus، Lactobacillus curvatus، Lactobacillus brevis، Lactobacillus delbrueckii subsp. Delbrueckii، Lactobacillus acidophilus، Lactobacillus gasseri در گروه باکتری های پروبیوتیک طبقه بندی شده اند و نتایج این مطالعه نشان داد کهچال حاوی این باکتری های مفید است.