هدف: با توجه به اهمیت پونه کوهی (Mentha longifolia) در صنایع دارویی، این مطالعه با هدف ارزیابی تاثیر ملاتونین بر درصد زندهمانی سلولی و سطح ترکیبات زیستفعال مهم پونه کوهی انجام شد. مواد و روشها: این مطالعه در قالب آزمایش فاکتوریل با طرح پایه کاملا تصادفی با سه تکرار انجام شد. ملاتونین (با غلظتهای 0، 100 و 200 میکرومولار بر مبنای مطالعات گذشته) به محیط کشت MS حاوی 2,4-D با غلظت mg.L-1 1 افزوده شد. بعد از 24، 48 و 72 ساعت از تیمار، درصد زندهمانی سلولی و سطح ترکیبات مهم پونه بهترتیب توسط آزمون تترازولیوم و HPLC سنجش شدند. نتایج: با افزودن ملاتونین در کشتسلولی، زندهمانی سلول های پونه کاهش یافت. با افزایش ملاتونین از 100 به 200 میکرومولار در کشتسلولی، سطح ترکیبات بهطور معنیداری نسبت به شاهد افزایش یافت. سطوح منتول، منتون، پولگون و 1،8-سینئول تا 48 ساعت بعد از تیمار افزایش یافتند اما بعد از آن زمان، کاهش معنیداری نشان دادند. از آنجاییکه هدف نهایی، افزایش تولید ترکیبات فعال بیولوژیکی است و نه بالاترین زندهمانی سلولی، لذا با رعایت اعتدال، 48 ساعت بعد از اعمال تیمار 200 میکرومولار ملاتونین، بهترین شرایط را برای حصول سطح بالای متابولیتهای با ارزش پونه فراهم میکند. بهطوریکه تیمار فوق باعث افزایش 125 درصدی منتول، 130 درصدی منتون، 140 درصدی پولگون و 120 درصدی 1،8-سینئول شد. نتیجهگیری: کاربرد ملاتونین در غلظت 200 میکرومولار و برداشت متابولیتها 48 ساعت بعد از تیمار میتواند ضمن حفظ سطح کافی زندهمانی سلولهای پونه کوهی، باعث افزایش غلظت متابولیتهای ثانویه شود.