زمینه: هدف از این مطالعه تخلیص ساب کلاس IgG2a موش می باشد محصولی که برای ایمونیزاسیون حیوانات دیگر جهت تولید هیبریدوماها در پروسه تولید آنتی بادیهای مونو کلونال و تولید آنتی بادیهای پلی کلونال به کار می رود. روش کار: در قدم نخست کروماتوگرافی تعویض یونی (Ion exchange chromatography) برای تخلیص IgG موش و در مرحله بعد افینیتی کروماتوگرافی با پروتئین ProA) A) برای تخلیص ساب کلاس IgG2a موش به کار برده شد. بعد از هر مرحله تخلیص روش الکتروفورز SDS-PAGE برای تایید خالص سازی به کار رفت. در مرحله آخر تایید ساب کلاس آنتی بادی خالص شده با کمک کیت تعیین ایزوتایپ صورت گرفت. یافته ها: رسوب ایمونوگلوبولین های موشی با غلظت mg/ml 27 به مقدار 3 سی سی روی ستون افینیتی کروماتوگرافی Ion exchange برده شد. مقدار محصول IgG از ستون تعویض یونی Ion exchange) ) 28 میلی گرم و مقدار محصول IgG2a ستون ProA، 8 میلی گرم بود. در نتایج الکتروفورز SDS-PAGE در حالت احیا دو باند در موقعیت وزن مولکولی 25 و 50 کیلودالتون( KDa) مشاهده شد. تعیین ایزوتایپ محصول به دست آمده وجود IgG2a با زنجیره سبک کاپا را تایید کرد. نتیجه گیری: در این مطالعه محصول IgG2a با خلوص بالای 95% به دست آمد. خلوص بالای محصول به دست آمده نشان می دهد که کروماتوگرافی تعویض یونی و به دنبال آن کروماتوگرافی با ProA روش مناسبی برای تخلیص ساب کلاسهای IgG موش با کیفیت و خلوص بالا می باشد. تولید این محصول مناسب و اقتصادی با درجه خلوص بالا قدمی به سوی اسقلال کشور است.

کروماتوگرافی مایع سریع پروتئین، نوعی از کروماتوگرافی مایع با فشار متوسط است که برای خالص سازی پروتئین ها با تفکیک پذیری و تکرارپذیری بالا ایجاد شده است. ویژگی متمایز این روش، فاز ساکن آن است که از دانه های با قطر کم (رزین هایی که با آگارز، کراس لینک شده اند) تشکیل شده و درون یک ستون استوانه ای شیشه ای یا پلاستیکی با حجم بالا قرار گرفته است. در دستگاه FPLC طیف گسترده ای از بافرهای آبی (فاز متحرک) و فازهای ساکن بکار گرفته می شوند تا انواع روش های معمول کروماتوگرافی (تبادل یونی، اندازه طردی، جذبی و برهم کنش آبگریزی) اجرا شوند. با این حال، تبادل آنیونی و اندازه طردی، روش هایی هستند که بیشترین استفاده را دارند.

آلفا توکسین یا فسفولیپاز C  (PLC ) توسط باکتری کلستردیوم پرفژنس تولید می گردد و خواص کشنده درمونوکرتیک را دارا می باشد. تمامی سویه های کلستردیوم قادر به تولید این توکسین می باشند که در توسعه میونکروز کلستریدی نقش بسزایی را ایفا می کنند. آلفا توکسین باعث بروز علائم در انسان و دام می گردد و تأثیرات کشنده بر سیستم روده ای را نشان می دهد. در این تحقیق سعی بر آن خواهیم داشت که روش های متفاوت خالص سازی و استخراج آلفا توکسین کلستردیوم پرفژنس تیپ A را با هم مقایسه نماییم. روش اول شامل خالص سازی آلفا توکسین با استفاده از تکنیک های ترکیبی کروماتوگرافی شامل رسوب دهی سولفات آمونیوم، کروماتوگرافی تبادل یون با استفاده از DEAE- Sephadex در مقادیر 7 و 9 pH  و کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با استفاده از Sephadex G-100 بود، روش دوم مبتنی بر استفاده از کروماتوگرافی افینیتی اجرا گردید. درجه خلوص توکسین آلفا در هر مرحله از فرآیند خالص سازی با استفاده از SDS-PAGE ارزیابی گردید .با بررسی نتایج حاصل از دو روش فوق نتایج زیر حاصل گردید. بازدهی روش اول 88 درصد و بازده روش دوم 7/91درصد بود. مقادیر فعالیت ویژه برای روش اول و دوم به ترتیب   U/mg 69170 و U/mg 71/105 محاسبه گردید. نتایج  نشان داد که از روش کروماتوگرافی افینیتی می توان برای خالص سازی آلفا توکسین تولیدشده از کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ A با خلوص بالا و نسبت فعالیت به مقدار پروتئین (HU/mg) 108700 استفاده گردد.

زمینه و هدف: امروزه، مصرف مواد مخدر یک مشکل جدی در جوامع بوده و تشخیص آن در نمونه ادرار خیلی مهم است. عموما، برای تشخیص مواد مخدر در ادرار از روش های متداول ایمنوکروماتوگرافی (Immunochromatography, ICG) و کروماتوگرافی لایه نازک Thin Layer Chromatography, TLC استفاده می شود. این روش ها اقتصادی و سریع هستند، اما دقت آن ها در شناسایی مقادیر کم از مواد مخدر (Cut off>) بسیار کم است. مورفین، آمفتامین و مت آمفتامین مواد مخدر متداولی هستند که به طور وسیعی استفاده می شوند. هدف این تحقیق، مقایسه روش های ایمنوکروماتوگرافی، کروماتوگرافی لایه نازک و کروماتوگرافی گازی (Gas Chromatography, GC) در تشخیص مورفین، آمفتامین و مت آمفتامین در نمونه های ادرار افراد سالم اسپایک شده با مواد مخدر و افراد معتاد و مقایسه حد تشخیص آن ها با هم است. مواد و روش ها: تحقیق حاضر به روش تجربی بر روی نمونه های ادرار افراد سالم و معتاد مراجعه کننده به آزمایشگاه مرکز مشاوره ازدواج هفتم تیر استان آذربایجان شرقی در خردادماه 1397 انجام یافته است. نمونه های ادرار جمع آوری شده و به نمونه های افراد سالم به طور دستی غلظت های مختلفی از مورفین، آمفتامین و مت آمفتامین اضافه شد. سپس مقادیر مورفین، آمفتامین و مت آمفتامین نمونه ها، با سه روش ICG، TLC و GCاندازه گیری شدند. یافته ها: نتایج نشان داد که تکنیک های ICG و TLC قادر به تشخیص مورفین، آمفتامین و مت آمفتامین در مقادیر کمتر (

سال های زیادی است که از دستگاه های چند آشکارسازی در کروماتوگرافی گازی استفاده می شود. با وجودی که طیف سنج جرمی هنوز در مورد نمونه های پیچیده محبوب ترین آشکارساز کروماتوگرافی گازی است، ولی یک دستگاه چند آشکارسازی می تواند تمام اطلاعات مورد نیاز برای اهداف تأیید را فراهم کند. در این مقاله انواع مختلفی از تنظیمات کروماتوگرافی گازی چند آشکارسازی و دستگاه های مدرن موجود در بازار تشریح می شود. همچنین در این مقاله مروری، کاربرد دستگاه های چند آشکارسازی دارای آشکارسازهای مختلف در کروماتوگرافی گازی مطرح شده است. متداول ترین دستگاه شامل آشکارسازهای موازی به همراه یک شکاف دهنده خروجی (پس از محل تزریق یا پس از ستون) است.

مقدمه: زرده تخم مرغ، منبعی سرشار و قابل دسترس از ایمونوگلوبولین (Ig Y)Y است که امکان استفاده از آن برای تشخیص طبی و درمان علیه عوامل میکروبی وجود دارد.مواد و روش ها: در مطالعه حاضر، مرغ ها علیه IgG خالص انسان به عنوان آنتی ژن ایمن شدند. پس از ایمن سازی، IgY از زرده با روش محلول سازی در آب مقطر اسیدی استخراج و با سه روش کروماتوگرافی تعویض یونی، کروماتوگرافی جذبی و رسوب دهی با پلی اتیلن گلیکول (PEG) 6000 تخلیص و بررسی شد. برای تخمین وزن مولکولی و اندازه گیری فعالیت محصول، به ترتیب از روش الکتروفورز در ژل پلی آکریل آمید (SDS-PAGE) و آزمون الایزا استفاده شد.نتایج: نتایج نشان داد که راندمان و خلوص کروماتوگرافی جذبی در تخلیص IgY ضد IgG انسانی به ترتیب 77 و 95 درصد است. در مقابل، IgY تام با دو روش دیگر از زرده حاصل گردید. روش رسوب دهی با PEG که ساده تر، کم هزینه تر و سریع تر از روش کروماتوگرافی تعویض یونی است، به ترتیب دارای راندمان و خلوص 90 و 95 درصد بود. در روش کروماتوگرافی تعویض یونی، راندمان و خلوص IgY تام به ترتیب 72 و 68 درصد بود. به علاوه در این مطالعه، وزن مولکولی کامل IgY معادل 190 و وزن زنجیره های سبک و سنگین آن به ترتیب 27 و 66 کیلودالتون تخمین زده شد. IgY اختصاصی یا فراکسیون IgY حاصل را می توان بنابر اهداف مختلف تشخیص طبی به کاربرد.

لطفا برای مشاهده چکیده به متن کامل (pdf) مراجعه فرمایید.

سیلیکاژل مورد استفاده در کروماتوگرافی لایه نازک از ویژگی های فیزیکی و شیمیایی ویژه ای برخوردار است که از نظر توزیع اندازه ذرات، سطح ویژه، حجم حفره ها و قطر حفره ها در گستره مشخصی قرار می گیرد. در این پژوهش، برای ساخت این نوع سیلیکاژل پس از جمع آوری و بررسی اسناد و مدارک علمی مورد نیاز روش موسوم به روش دوغابی انتخاب شد. در این روش با استفاده از سدیم سیلیکات و سولفوریک اسید و با تکیه بر تجارب و امکانات موجود در گروه پژوهشی شیمی معدنی نمونه آزمایشگاهی مورد تایید تهیه شد. به منظور دست یابی به ویژگی های سیلیکاژل کروماتوگرافی لایه نازک یک نمونه تجاری معتبر با کد St.MN به عنوان معیار برای سنجش ویژگی های نمونه های ساخته شده، مورد استفاده قرار گرفت. در ساخت نمونه ها با کنترل زمان واکنش در گستره 12 تا 15 دقیقه، رشد ذرات سیلیکا در مرحله تهیه هیدروسل محدود شد و با کنترل دما و pH در حمام انعقاد هیدروسل در گستره 80 °C تا 85 و pH برابر با 9 هیدروژل تهیه شد. در مرحله پیوندسازی و شست وشوی هیدروژل، فراوری هیدروژل به دست آمده صورت پذیرفت. در این مرحله، هم زدن هیدروژل پس از 30 دقیقه از زمان انعقاد و نیز شست وشو در pH برابر با 4 تا 5 در دمای محیط اجرا شد با پخت نهایی هیدروژل های به دست آمده فراوره سیلیکاژل تهیه شد. نتیجه های آزمایش های اولیه نظیر تعیین ظرفیت جذب، دانسیته توده ای و pH سوسپانسیون 10% در آب و نیز نتیجه های به دست آمده با روش هایXRF ، BET، و اندازه گیری ذرات (PSA) نشان می دهند نمونه های ساخته شده با کد STC07 و STC08 در مقایسه با نمونه تجاری با کد St.MN از تطبیق قابل قبولی برخوردار است. هم چنین صفحات TLC تهیه شده با نمونه های ساخته شده در مقایسه با نمونه تجاری مورد آزمایش عملکردی قرار گرفته و عملکرد مشابه از خود نشان دادند.