مقدمه: Fasciolosis یک بیماری انگلی است که توسط گونه های Fasciola hepatica، Fasciola gigantica و Fasciola حد واسط ایجاد می گردد. این بیماری، در طیف گسترده ای از گونه های پستانداران نظیر انسان در سراسر جهان شیوع یافته است. روش Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP)، یکی از بهترین روش ها: ی تشخیص گونه های Fasciola در نقاطی است که دو گونه ی Fasciola hepatica و Fasciola gigantica در دام های اهلی وجود دارند. روش ها: در این مطالعه، کرم های Fasciola از کشتارگاه های چهار استان غرب کشور ایران جمع آوری گردید. گونه های انگلی، با استفاده از روش ها: ی ریخت شناسی و مولکولی شناسایی شدند. از 715 راس دام (گاو و گوسفند) مورد بررسی، 92 راس کبد آلوده به کرم بالغ Fasciola داشتند. 18 کرم بالغ از نظر ریخت سنجی بررسی شدند و از تخم این کرم ها، استخراج DNA صورت گرفت. قطعه ای از ژنوم نواحی ITS1, 5. 8S, ITS2 تکثیر و با استفاده از آنزیم TasI، آزمون PCR-RFLP روی قطعات تکثیر یافته انجام شد. یافته ها: در مجموع، 178 کرم بالغ Fasciola از کبدهای آلوده ی گاو و گوسفند جداسازی گردید. طی بررسی که در فصل بهار سال 1396 انجام شد، بیشترین و کمترین آلودگی به ترتیب مربوط به استان ایلام (گاو 57/28 درصد) و استان خوزستان (گوسفند 26/8 درصد) گزارش گردید. آنزیم TasI در Fasciola hepatica سه قطعه ی به طور تقریبی 427، 360 و 117 جفت باز و Fasciola gigantica، سه قطعه ی به طور تقریبی 360، 220 و 117 جفت باز بر روی ژل آگارز 5/1 درصد ایجاد کرد. نتیجه گیری: بر اساس یافته ها: ی این مطالعه، اندازه گیری های میکروسکوپی می تواند برای توصیف میکروسکوپیک گونه های Fasciola کافی باشد، اما استفاده از روش PCR-RFLP با استفاده از آنزیم TasI ساده تر، سریع تر و دقیق تر می باشد. استفاده از روش PCR-RFLP و نشانگر ژنتیک ITS، جهت شناسایی گونه های Fasciola بسیار مناسب است.