3 SID.ir | توليد آنتي بادي مونوكلونال عليه آنزيم آلكالين فسفاتاز

مشخصات مقاله

عنوان نشریه: 
 
عنوان مقاله: 

توليد آنتي بادي مونوكلونال عليه آنزيم آلكالين فسفاتاز

 
نویسندگان: 
 
آدرس:  
* تهران، دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده علوم پزشکی، گروه ایمونولوژی
 
چکیده: 

هدف: توليد آنتي بادي مونوكلونال عليه آنزيم آلكالين فسفاتاز به منظور استفاده در روشهاي ايمونوهيستوشيمي و ايمونوسيتوشيمي مثل روش آلكالين فسفاتاز - آنتي آلكالين فسفاتاز.(APAAP)
مواد و روشها: در اين پژوهش ابتدا خموشهاي Balb/c ماده تحت تزريقات منظم آنزيم آلكالين فسفاتاز قرار گرفتند و تيتر آنتي بادي توليد شده پس از هر تزريق مورد بررسي قرار گرفت. پس از اطمينان از ايمن شدن موشها بين لنفوسيتهاي طحالي آنها و سلولهاي ميلوماي Sp2/0 با كمك پلي اتيلن گليكول PEG)، 50درصد) امتزاج برقرار شد و هيبريدوماهاي توليد شده به كمك محيط انتخابي HAT جداسازي شدند. بر روي مايع رويي تمام كلونهاي هيبريدومايي تشكيل شده، آزمون الايزا انجام گرفت تا كلونهاي مولد آنتي بادي عليه آلكالين فسفاتاز شناسايي و انتخاب شوند. كلونهاي توليد كننده آنتي بادي با كمك روش آخرين حد رقت (Limiting Dilution) (دو مرتبه) به صورت زير كلون خالص در آمده و توسعه يافتند. چون پس از تشكيل كمپلكس APAAP، فعاليت آنزيمي بايد حفظ شود تا بتوان از اين كمپلكس در تكنيكهاي ايمونوهيستوشيمي بهره برد، لذا اتصال آنتي بادي نبايد باعث توقف فعاليت آنزيمي گردد. به منظور بررسي اين موضوع، آزمايش الايزايي طراحي شده و مايع رويي كشت كلونهاي هيبريدومايي انتخاب شده، توسط روش الايزاي مذكور، بررسي شد. در مرحله بعد جهت توليد آنتي بادي با غلظت زياد، هيبريدوماها به صفاق موش تزريق شدند و پس از تشكيل تومور، مايع صفاقي جمع آوري گرديد. نهايتا آنتي باديهاي توليدي توسط هيبريدوماهاي به دست آمده تعيين ايزوتيپ شدند.
يافته ها: در 6 بار فيوژن، 104 كلون هيبريدومائي بدست آمد كه از اين تعداد، 2 كلون A1G8 و A1G9 كه مولد آنتي بادي اختصاصي و واجد جذب بالا در آزمايش الايزا بودند، انتخاب شد. پس از اجراي روش آخرين حد رقت نهايتا دو زير كلون A1G8F7 كه بصورت تك كلون درآمده بودند انتخاب گشتند. آزمايشات الايزا نشان داد كه آنتي باديهاي توليدي توسط هيبريدوماهاي بدست آمده پس از اتصال به آنزيم، تاثيري بر فعاليت آن نگذاشته و به عبارت ديگر به ناحيه فعال آنزيم متصل نمي شوند. نتايج الكتروفورز مايع صفاقي موشهايي، كه در آنها به وسيله هيبريدوماهاي توليدي، القاء تومور شده بود، باند پروتئيني مشخصي در ناحيه Y را نشان داد. آزمايشات مربوط به تعيين كلاس و زير كلاس آنتي باديهاي توليد شده توسط كلونهاي هيبريدومايي نشان دادك كه هر دو آنتي بادي مذكور از كلاسIgG ، زير كلاس IgG1  و داراي زنجيره سبك K هستند.
نتيجه گيري: چون آنتي باديهاي توليد شده توسط كلونهاي هيبريدومايي بدست آمده. از كلاس IgG بوده و روي فعاليت آنزيمي نيز تاثيري ندارند. لذا براي تشكيل كمپلس APAAP مناسب به نظر مي رسند. ساير مراحل اين پژوهش تا تشكيل اين كمپلكس و استفاده عملي از آن در تكنيكهاي ايمونوهيستوشيمي در حال انجام است.

 
کلید واژه: 

 
موضوعات مرتبط: 
-
 
ارجاعات: 
 
 
مقالات نشریه ای مرتبط: 
 
مقالات همایشی مرتبط: 
 

  چکیده انگلیسی بازدید یکساله 215
 
 
آخرین های بلاگ
ورود به بلاگ مرکز اطلاعات علمی