مطالعه سه روش خالص سازي HBV DNA جهت استفاده در تكنيك PCR

تشخيص هپاتيت B با توجه به فراواني ميزان عفونت ناشي از آن از اهميت ويژه اي برخوردار است. در بين روشهاي تشخيصي، اخيرا تكنيك PCR بيش از پيش مورد توجه قرار گرفته است. گزارش هاي ارايه شده در مراكزي كه از اين تكنيك استفاده مينمايند حاكي از وجود برخي از موارد منفي كاذب ميباشد. هدف از انجام اين مطالعه بررسي مقايسه اي بين روشهاي خالص سازي رايج ميباشد تا ضمن آگاهي از ميزان كارايي هر يك بهترين روش شناسايي گردد.
از 30 نمونه دريافتي از بيماران مراجعه كننده به درمانگاه هپاتيت بيمارستان شريعتي تهران كه مبتلا به هپاتيت مزمن بوده و HBs آنتي ژن مثبت و HBe آنتي ژن منفي بودند نمونه سرم تهيه گرديد. استخراج HBV DNA با سه روش توسعه يافته جوشاندن بعنوان يك روش سريع، روش فنل كلروفرم بعنوان يك روش دقيق، و روش خالص سازي مبتني بر گوانيديوم هيدروكلرايد انجام گرديد. كيتPCR براي تشخيص هپاتيت از شركت سيناژن استفاده گرديد كه شامل آنزيم taq پليمراز و مخلوط واكنشي متشكل از پرايمرdNTP  و بافر واكنش بود. پروتكل PCR مزبور قادر به تكثير محصولي به طول 353bp بود. سپس با چرخه گرمايي مناسب نمونه ها با واكنش PCR تكثير گرديد و محصول PCR در سه روش مقايسه شد.
نتايج بدست آمده در مرحله اول مويد موفقيت پروتكل استفاده شده در تشخيصDNA هپاتيت B در سرم بود. همچنين ميزان موارد مثبت روش جوشاندن، روش فنل كلروفرم و كيت خالص سازي به ترتيب 19،16 و 23 و موارد منفي به ترتيب 14، 11 و 7 مورد بود.
روش PCR سريعترين و دقيق ترين روش جهت شناسايي بيماران بوده و روش تخليص DNA توسط گوانيديوم هيدروكلرايد در ويروس ها موفقيت آميز ترين روش بكار رفته در اين بررسي است.