مشخصات مقاله

 
عنوان مقاله: 

بيان نوترکيب و تخليص زنجيره سبک نوروتوکسين بوتولينوم تيپA در E. coli از يک ژن مصنوعي

 
نویسندگان: 
 
آدرس:  
* مرکز تحقيقات زيست شناسي، دانشکده علوم پايه، دانشگاه جامع امام حسين (ع)، تهران، ايران، کدپستي 1653765513
 
چکیده: 
نوروتوکسين هاي بوتولينوم، سمي ترين ترکيبات بيولوژيک شناخته شده اند که باعث ايجاد فلج عضلاني مي شوند. خاصيت آنزيمي اين توکسين ها، مهار آزاد سازي ميانجي عصبي استيل کولين را باعث مي شود. مطالعه حاضر با هدف توليد نوترکيب بخش کاتاليتيک (زنجيره سبک) سم بوتولينوم تيپ A با درصد خلوص بالا، به منظور ارزيابي فعاليت آنزيمي انجام شد. توالي ژن زنجيره کاتاليتيک نوروتوکسين بوتولينوم تيپ A از پايگاه ژني NCBI گرفته شد. پس از بهينه سازي کدون ترجيحي ژن مورد نظر براي E. coli، توالي نهايي ژن به منظور سنتز در وکتور بياني pET28a(+) سفارش داده شد. پس از انتقال وکتور بياني نوترکيب داراي ژن مذکور به ميزبان E. coli BL21-DE3، فرايند بيان در شرايط استاندارد انجام شد. در ادامه توليد پروتئين مورد نظر به شکل محلول با بهينه سازي کشت ميزبان و بيان پروتئين صورت پذيرفت. پروتئين بياني به وسيله ستون Ni-NTA تخليصو با آنتي بادي اختصاصي مورد تاييد قرار گرفت. در اين تحقيق بالاترين ميزان بيان به شکل محلول، در شرايط غلظت 5/0 ميلي مولار IPTG، با جذب نوري 5/0 و زمان القاي 18 ساعت در دماي 18 درجه سانتي گراد به دست آمد. آزمايش هاي وسترن بلات و الايزا، وجود پروتئين هدف را تاييد کردند. براساس نتايج، زنجيره سبک نوروتوکسين بوتولينوم تيپ A به شکل محلول توليد شد. فرايند تخليص نيز با رزين تمايلي با کيفيت عالي انجام شد به طوري که پروتئين مورد نظر با درصد خلوص 98 به دست آمد.
 
كلید واژه: 

 
موضوعات مرتبط: 
-
 
ارجاعات: 
  • ندارد
 
 
مقالات نشریه ای مرتبط: 
 
مقالات همایشی مرتبط: 
 

  چکیده انگلیسی بازدید یکساله 16
 
 
آخرین های بلاگ
ورود به بلاگ مرکز اطلاعات علمی