شناسايي و تخليص شاخصهاي آنتي ژني هليكوباكتر پيلوري

هليكوباكتر پيلوري يك عامل مهم در ايجاد عفونت مزمن خاط معده، گاستريت مزمن، زخمهاي پپتيك و سرطان معده در انسان است. اين ميكروارگانيسم گرم منفي به شكل S و ميكروائروفيل بوده داراي آنزيم اوره آز قوي ميباشد. پس از ورود به معده به سطوح اپي تليوم مخاط معده چسبيده و كلونيزه مي شود و به دنبال آن آسيبهاي فيزيولوژيك و سيتولوژيك عارض مي گردد. روشهاي مختلفي براي شناسايي اين باكتري وجود دارد از جمله كشت باكتري، اوره آز تنفسي و روشهاي سرولوژيك. روشهاي سرولوژيك به واسطه سهولت در انجام آن و سرعت در پاسخدهي از اهميت ويژه اي برخوردار است.
در اين تحقيق سعي شد تا با جداسازي باكتري از بيوپسي افراد آلوده آنتي ژنهاي اختصاصي اين باكتري شناسايي و تخليص شود. به اين منظور پس از كشت باكتري، سوسپانسيون كلني هاي خالص آن تهيه و به كمك امواج اولتراسونيك ديواره باكتري ليز شد. پس از تعيين الگوي الكتروفورزي پروتئينهاي آن به روش SDS-PAGE، با تكنيك كروماتوگرافي پروتيينهاي موجود در سوسپانسيون باكتري ليز شده براساس وزن مولكولي از يكديگر تفكيك و در نتيجه 11 فراكشن به دست آمد. پس از تعيين وزن مولكولي اين فراكشنها به كمك روش SDS-PAGE واكنش آنها با سرم افراد كشت مثبت به روش DOT-Blotting بررسي شد. نتايج به دست آمده نشان داد كه تمام فراكشنهاي به دست آمده از باكتري با آنتي باديهاي موجود در نمونه سرم افراد كشت مثبت و همچنين سرم افراد كشت منفي واكنش مي دهد و تنها شدت پاسخ در اين دو گروه متفاوت است. همچنين مقايسه الگوي پاسخ فراكشنها در اين دو گروه نشان داد كه دو فراكشن پاسخ متمايزي نسبت به ساير فراكشنها ايجاد مي نمايد. يكي از اين فراكشنها حاوي پروتيين با وزن مولكولي حدود 28.1 و ديگري كمتر از 14 كيلو دالتون بود. با توجه به نتايج به دست آمده به نظر ميرسد استفاده از اين دو فراكشن در تهيه كيتهاي ELISA بتواند تا حدود زيادي مشكل جوابهاي غيراختصاصي حاصل از كيتهاي موجود را كه در آن از تمامي پروتيينهاي باكتري جهت تشخيص آنتي بادي ضد آن استفاده مي شود، مرتفع نمايد.