توليد آنتي بادي پلي كلونال بر عليه گلبول هاي قرمز گوسفند (همولیزین) در خرگوش

هموليزين كاربرد تشخيصي - آموزشي متعدد داشته كه از جمله آنها سنجش عملكرد اجزاي كمپلمان در قالب انجام تست CH50 و آموزش عملي اين تست براي دانشجويان مقاطع كارشناسي ارشد و PHD رشته هاي مختلف مثل ايمونولوژي و بيوشيمي است. هدف از انجام اين طرح توليد هموليزين در راستاي خودكفايي با كمترين هزينه اقتصادي مي باشد. براي توليد هموليزين در خرگوش از گلبول هاي قرمز گوسفند (SRBC) به عنوان ايمونوژن براي بدن خرگوش استفاده مي شود. خون هپارينه از چندين گوسفند تهيه شده و با يكديگر مخلوط (pooled) گرديد. سپس با سرم فيزيولوژي شستشو داده شد و با استفاده از Cell Counter شمارش گرديد و به تعداد 109× 5-1 به طور داخل وريدي (IV) به خرگوش تزريق شد. هفت الي ده روز بعد از تزريق كه اوج توليد آنتي بادي پلي كلونال از كلاس IgM مي باشد. خونگيري از خرگوش به عمل آمد و سرم غني از هموليزين جدا گرديد. در راستاي سنجش عملكرد هموليزين و استاندارد نمودن آن، هموليزين تيتر گرديد. براي تعيين اينكه در چه تيتري از هموليزين، گلبول هاي قرمز فقط حساس مي شوند و نه آگلوتينه، رقتهاي مختلفي از هموليزين تهيه و روي حجم ثابتي از SRBC اضافه گرديد. نتايج نشان داد كه تيتر هموليزين توليدي 2560 بود. يعني با رقت 2560 نيز قادر به حساس كردن SRBCs به هدف بررسي عملكرد اجزاي توتال كمپلمان بود. براي اطمينان از عملكرد در حد استاندارد، تست CH50  با استفاده از هموليزين توليدي و هموليزين استاندارد (Sigma) به عمل آمد. نتايج نشان داد كه هموليزين توليدي با تيتر 2560 همچون هموليزين استاندارد قادر به حساس كردن گلبول هاي قرمز گوسفند مي باشد. تيتر بالاي هموليزين توليدي در مقايسه با تيتر هموليزين استاندارد دال بر اهميت و اقتصادي بودن محصول توليدي دارد. بنابراين هموليزين توليدي يك محصول مفيد بوده و در اهداف تشخيصي داراي اهميت مي باشد.