کلون سازي، بيان و تخليص پروتئين اينتگراز ويروس HIV و بررسي آنتي ژنيسيته آن

زمينه و هدف: ارتقا روش هاي تشخيصي جهت شناسايي افراد آلوده به HIV، يكي از راه هاي مقابله با انتشار ويروس به شمار مي رود. به دليل بالابودن ميزان موتاسيون در اين ويروس، لازم است تا براي راه اندازي روش هاي ايمنواسي تشخيصي از پروتئين هاي محافظت شده، استفاده شود. به دليل آنكه پروتئين اينتگراز يكي از محافظت شده ترين پروتئين هاي HIV است، آنتي ژن مناسبي براي اين منظور به شمار مي رود. در اين مطالعه ضمن كلون سازي و تخليص اين پروتئين، ايمنوژنيسيته آن نيز مورد بررسي قرار گرفته است.
روش كار: ژن اينتگراز در وكتور بياني pET28a كلون گرديد. پلاسميد نوتركيب حاصله به باكتري E.coli انتقال يافته و بيان پروتئين با استفاده از IPTG القا شد. بررسي ايمنوژنيسيته پروتئين بيان شده با تكنيك وسترن بلات صورت گرفت. تخليص پروتئين با استفاده از كروماتوگرافي ميل تركيبي با رزين هاي Ni-NTA انجام پذيرفت.
يافته ها: القا باكتري هاي ترانسفرم شده با IPTG به بيان پروتئين اينتگراز منجر گرديد و به اين ترتيب پس از بهينه سازي شرايط بيان، حدود 40 درصد پروتئين هاي باكتريايي به پروتئين نوتركيب مورد نظر اختصاص پيدا كرد. انجام وسترن بلات نشان دهنده واكنش ايمني اختصاصي با سرم افراد آلوده به HIV بود. به ازا هر يك ليتر كشت باكتري، 75 ميلي گرم اينتگراز تخليص گرديد.
نتيجه گيري: پروتئين توليدشده به واسطه حفظ خاصيت آنتي ژنيك خود، قابليت به كارگيري در روش هاي تشخيصي ايمنواسي را دارد. با استفاده از بهينه سازي شرايط كشت و بيان پروتئين مي توان به باكتري هاي نوتركيبي دست يافت كه توليد پروتئين در آن ها با بازده بالايي صورت مي پذيرد و بنابراين امكان استفاده از آن ها در اهداف صنعتي وجود خواهد داشت.