تشخيص هم زمان باکتري هاي بيماري زاي ليستريا منوسايتوژنز، اشرشيا کلي O157:H7 و جنس سالمونلا به روش multiplex PCR در سبزيجات آماده مصرف

آلودگي هاي باکتريايي مواد غذايي يکي از مهمترين مسائل در زمينه ايمني مواد غذايي مي باشد. لذا استفاده از روش هاي تشخيصي سريع و دقيق حائز اهميت است. يکي از مهم ترين اين روش ها، تکنيک مولکولي PCR است که امکان تشخيص دقيق و با حساسيت بالا در مدت زمان کم، از مزاياي آن است. اما در صورتي که تشخيص چندين باکتري بيماريزا مد نظر باشد،  multiplex PCR (mPCR)بهترين گزينه خواهد بود. در اين تحقيق از سه باکتريليستريا منوسايتوژنز، اشرشيا کلي O157:H7 و جنس سالمونلا (سالمونلا انتريکا سرووار تيفي موريوم) که از باکتريهاي بيماريزاي مهم منتقل شده از طريق آب و مواد غذايي هستند استفاده شد و به کاهو، که نمونه اي از سبزيجات پر مصرف در تهيه سالاد هاي آماده است، تلقيح و با روش mPCR بطور همزمان شناسايي شدند. بدين منظور مخلوطي از پرايمر هاي اختصاصي مربوط به باکتريها يعني، invA (پروتئين تهاجمي A) براي جنس سالمونلا با 284 جفت باز، prfA (پروتئين افزايش دهنده نسخه برداري از ژن هاي عامل ويرولانس) براي ليستريا منوسايتوژنزبا217  جفت باز وrfb  (ژن مسوول توليد آنتي ژن (O157 براي اشرشيا کلي O157:H7 با420  جفت باز، به همراه  DNAاستخراج شده از مخلوط سه باکتري تلقيح شده به کاهو و ساير معرف هاي واکنشPCR  به يک لوله واکنش، منتقل و همزمان PCR شدند. با اين روش، امکان تشخيص همزمان سه باکتري بيماريزاي فوق با حساسيت  1cfu/gامکان پذير شد.