3 SID.ir | تعيين نيمه كمي ميزان بيان mRNA اينترفرون گاما با استفاده از روش RT-PCR

مشخصات مقاله

 
عنوان مقاله: 

تعيين نيمه كمي ميزان بيان mRNA اينترفرون گاما با استفاده از روش RT-PCR

 
نویسندگان: 
 
آدرس:  
* گروه ایمنولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان
 
چکیده: 
سايتو كاينها واسطه هاي شيميايي هستند كه از سلول هاي سيستم ايمني ترشح شده، و بر سلول هاي ديگر يا خود سلول ترشح كننده اثر ميكنند. بيان متفاوت ژن سايتوكاينها در بدن مشخص كننده نوع پاسخ ايمني (از نوع Thl يا سايتو كاين ها سلول هاي Thl ميتوان به IFN-γ و IL-2 اشاره كرد. كه در پاسخ هاي ايمني عليه پاتوژن هاي داخل سلولي شركت ميكنند. با توجه به اين كه بيان ژن سايتوكاينها من جمله اينترفرون موقتي بوده و در يك مدت زمان محدود مي باشد. به اين علت لازم است بيان ژن آنها (مقدار mRNA) توسط روش هاي حساس و دقيق تري همانند RT-PCR اندازه گيري شود. به علاوه تعيين زمان مورد نياز جهت ماكزيمم بيان ژن مي تواند در مطالعات كلونينگ و استعداد ابتلا به بيماري ها در بعضي از افراد كاربرد داشته باشد.
بعد از كشت لنفوسيتها در حضور Phytohaemagglutinin)PHA)(با غلظت 1µg/106 cell) در زمان هاي متفاوت (72، 48، 24، 12، 48، 0 ساعت) و استخراج RNA توتال از آنها و سنتز cDNA تك رشته اي اقدام به انجام RT-PCR شد. چون در تمام ساعات انكوبه جواب مثبت بود. لذا در مرحله بعدي اقدام به تيتراتسيون cDNA حاصل با ضريب رقت 2 . 1 (رقت هاي متوالي 1.2، 1.4، 1.8، و . . ..) شد. بر روي ژل الكتروفورز (2%) قطعه مورد نظر (273bp) مشاهده شد.
نتايج به دست آمده از RT-PCR و Semi-quantitative-RT-PCR نشان ميدهد بعد از چهار ساعت انكوباسيون لنفوسيت ها با PHA، بيشترين بيان ژن را دارند (تيتر cDNA=512) و معمولا بعد از گذشت 24 ساعت مقدار آن به سطح اوليه (قبل از تحريك) برمي گردد.
با توجه به نتايج فوق و مقايسه آن با نتايج محققين ديگر مي گفت روش RT-PCR حساس ترين روش سنجش بيان ژن جهت سايتوكاينهاست و بيان ژن اينترفرون بعد ازگذشت چهار ساعت انكوبه به ماكزيمم ميرسد. بنابراين مدت زمان انكوباسين با PHA جهت بررسي اثر عوامل مختلف بر توليد و بيان ژن اينتر فرون گاما زمان ايده آلي است.
 
کلید واژه: 

 
موضوعات مرتبط: 
 
ارجاعات: 
  • ندارد
 
 
مقالات نشریه ای مرتبط: 
 
مقالات همایشی مرتبط: 
 

  چکیده انگلیسی بازدید یکساله 232
 
 
آخرین های بلاگ
ورود به بلاگ مرکز اطلاعات علمی