برای اطلاع از آخرین مقالات علمی و اخبار کرونا(COVID-19) کلیک کنید

مشخصات مقاله

عنوان نشریه: 
 
اطلاعات شماره: 
زمستان 1389 , دوره  8 , شماره  4 ; از صفحه 2162 تا صفحه 2168 .
 
عنوان مقاله: 

ساخت ناقل هاي نوترکيب حاوي ژن کدکننده پروتئين تنظيمي توليد آنتي بيوتيک استرپتومايسين، جدا شده از يک سويه استرپتومايسس گريزئوس ايراني

 
نویسندگان: 
 
آدرس:  
* بخش ژنتیک، دپارتمان بیولوژی، دانشکده علوم، دانشگام اصفهان، اصفهان، ایران
 
چکیده: 

StrR يک تنظيم کننده کليدي در رونويسي خوشه ژني بيوسنتز آنتي بيوتيک استرپتومايسين است. اين پروتئين توسط ژن strR استرپتومايسس گريزئوس با طول 1053 جفت باز کد مي شود. هدف اين تحقيق، کلونينگ ژن strR از سويه استرپتومايسس گريزئوس ايراني PTCC1127 و همچنين ATCC1952 در ناقل pMA::hyg بود. براي اين منظور پرايمرهاي اختصاصي ژن strR با نرم افزار Oligo طراحي شدند، قطعه با طول 1134جفت باز به روش PCR تکثير شد. سپس با روش Semi nested PCR و PCR-RFLP محصول PCR تاييد و درناقل تداخلي pMA::hyg مخصوص استرپتومايسس الحاق گرديد. در واکنش الحاق، به دليل به کارگيري دو جايگاه برش متفاوت BamHI و XbaI در دو انتهاي ژن strR و استفاده از همين دو جايگاه برش در ناقل pMA::hyg احتمال خودالحاقي (Self ligation) ناقل pMA::hyg وجود نداشت. در مرحله بعد، ناقل هاي نوترکيب ساخته شده به نام pSPstrR (حاوي ژن strR مشتق از سويه PTCC1127) و pSMstrR (حاوي ژن strR مشتق از سويه ATCC1952) به سلول هاي مستعد باکتري E. coli XL1-Blue ترانسفورم شدند. ساختار سازه هاي جديد توسط روش هاي مختلف مولکولي تاييد گرديد. از طرف ديگر ژن strR جدا شده در وکتور مولتي کپي و بياني pBluescript نيز ساب کلون گرديد. در آينده مي توان از اين ناقل هاي نوترکيب ساخته شده به عنوان ابزارهاي مناسبي براي جهش زايي جهت دار شده در جايگاه (site directed mutagenesis) و استراتژي هاي جايگزيني ژن (gene replacement) در استرپتومايسس گريزئوس استفاده کرد. از طرف ديگر از پروتئين توليد شده در E. coli ميتوان جهت القا و افزايش توليد آنتي بيوتيک در محيط کشت استرپتومايسس استفاده نمود. علاوه بر اين مي توان ژن strR را با واسطه يک ناقل بياني مثل pMT3206 در ميزبان استرپتومايسس گريزئوس کلون و اثر افزايش بيان اين ژن تنظيمي را در افزايش ميزان توليد آنتي بيوتيک استرپتومايسين بررسي کرد.

 
کلید واژه: 

 
موضوعات مرتبط: 
-
 
ارجاعات: 
  • ندارد
 
 
مقالات نشریه ای مرتبط: 
 
مقالات همایشی مرتبط: 
 

  چکیده انگلیسی بازدید یکساله 124
 
 
آخرین های بلاگ
ورود به بلاگ مرکز اطلاعات علمی