4 SID.ir | استخراج ليپو پلي ساكاريد LPS از ديواره E.coil و ارزيابي قابليت ميتوژني آن بر لنفوسيتهاي B با استفاده از سنجش MTT
برای اطلاع از آخرین مقالات علمی و اخبار کرونا(COVID-19) کلیک کنید

مشخصات مقاله

 
عنوان مقاله: 

استخراج ليپو پلي ساكاريد LPS از ديواره E.coil و ارزيابي قابليت ميتوژني آن بر لنفوسيتهاي B با استفاده از سنجش MTT

 
نویسندگان: 
 
آدرس:  
* مشهد، میدان فردوسی، میدان بوعلی-دانشگاه علوم پزشکی مشهد
 
چکیده: 

هدف: ليپوپلي ساكاريد (LPS)، تركيب مهمي از ديواره باكتريهاي گرم منفي و اندوتوكسين آنهاست.LPS  به عنوان يك ميتوژن باعث القاي تكثير سلولي در لنفوسيتهاي B، ترشح سايتوكايينهايي مانند فاكتور تكروز دهنده تومور(TNF)  و اينترلوكين يك(IL-1) در ماكروفاژها و بيگانه خوارهاي تك هسته اي مي شود. در اين طرح هدف از استخراج LPS، استفاده از آن به عنوان ميتوژن به منظور القاي پروليفراسيون سلولي در لنفوسيتهاي B بود.
مواد و روشها: پس از توليد انبوه باكتري E.coil در محيط كشت نوترينت براث(NB)  به وسيله دو روش متفاوت، با استفاده از فنل كلروفرم- اترپتروليوم(PCP)  و متانول – كلروفرم (MC)،LPS  استخراج شد. براي سنجش تكثير سلولي، سلولهاي لايه مونونوكلئار(MNL)  خون تام به وسيله فايكول جداسازي و در محيط كشت 1640 RPMI تكميل شده، كشت داده شد. سپس رقتهاي مختلف از PCP-LPS،MC-LPS  و LPS استاندارد سيگما به محيط كشت افزوده شد. ميزان تكثير سلولي، در پليت ماكروتيتراسيون 6 خانه به وسيله آزمون ارزيابي تعداد سلولهاي زنده با رنگ تريپان بلو و در پليتهاي ميكروتيتراسيون 96 خانه به وسيله سنجش MTT ارزيابي شد.
نتايج و بحث: در روش متانول - كلروفرم، هنگامي كه باكتريها با استن يا اتانول شسته شدند،LPS  استخراج شده به صورت توده اي چسبناك و در صورت شسته نشدن با اين مواد، به صورت مايع روغني شكل ظاهر شد. اما LPS حاصل از روش فنل-كلروفرم-اترپتروليوم به صورت رسوب به دست آمد. در آزمون ارزيابي سلولهاي زنده، ميزان پروليفراسيون سلولهاي تحريك شده با LPS به دست آمده از روشهاي استخراج متانول-كلروفرم(MC-LPS)  و فنل-كلروفرم- اتروپتروليوم(PCP-LPS)  بيشتر از گروه كنترل (سلولهاي بدون LPS) بود. در سنجش MTT،LPS  به دست آمده از روش استخراج فنل-كلروفرم-اترپتروليوم (PCP-LPS) نسبت به LPS به دست آمده از روش استخراج متانول – كلروفرم (MC-LPS) پروليفراسيون سلولي بيشتري نشان داد.
نتيجه گيري: اين نتيجه نمايانگر اين است كه LPS استخراج شده از روش فنل-كلروفرم-اترپتروليوم (PCP) قابليت ميتوژني بيشتري نسبت به LPS استخراج شده از روش متانول-كلروفرم (MC) دارد.
همچنين در مقايسه LPS استخراج شده از روش فنل-كلروفرم-اترپترليوم با LPS استاندارد سيگما به وسيله سنجش MTT، PCP-LPS  در رقتهاي مختلف (1.8، 1.4، 1.2) داراي جذب نوري يكساني يا LPS استاندارد در غلظتهاي مختلف (80µg/ml و 40، 20) بود و نمودار مربوط به PCP-LPS در جذبهاي نوري مختلف بر نمودار LPS استاندارد منطبق شد.

 
کلید واژه: 

 
موضوعات مرتبط: 
 
ارجاعات: 
  • ندارد
 
 
مقالات نشریه ای مرتبط: 
 
مقالات همایشی مرتبط: 
 

  چکیده انگلیسی بازدید یکساله 535
 
 
آخرین های بلاگ
ورود به بلاگ مرکز اطلاعات علمی