برای اطلاع از آخرین مقالات علمی و اخبار کرونا(COVID-19) کلیک کنید

مشخصات مقاله

عنوان نشریه: 
 
اطلاعات شماره: 
 
عنوان مقاله: 

كلونينگ، بيان و تخليص ژن بخش انتقال دهنده سم بوتولينوم تيپ A

 
نویسندگان: 
 
آدرس:  
* تهران، دانشگاه امام حسین، دانشکده علوم پایه، گروه علوم زیستی
 
چکیده: 

هدف: سم بوتولينوم تيپ A به لحاظ ساختاري از يک زنجيره سبک به وزن KD 50 و يک زنجيره سنگين به وزن KD 100 تشکيل شده است که به وسيله يک باند دي سولفيد به هم متصل شده اند. اين پروتئين شامل سه بخش عملکردي است. بخش آنزيمي با فعاليت کاتاليتيک که همان زنجيره سبک مي باشد. بخش انتقال دهنده که نيمه انتهايي آميني زنجيره سنگين است و بخش اتصال دهنده که نيمه انتهايي کربوکسيل زنجيره سنگين را تشکيل مي دهد. در اين پژوهش هدف از توليد نوترکيب بخش انتقال دهنده سم بوتولينوم تيپ A، مطالعه کارايي اين بخش از سم به طور مستقل يا همراه با بخش اتصال دهنده توکسين به منظور دستيابي به يک پروتئين ايمني زا در تحقيقات بعدي بوده است. از طرف ديگر توليد انبوه اين بخش از سم، مطالعه ساختار و مکانيزم دقيق بخش انتقال دهنده را هموار خواهد ساخت.
مواد و روشها: باکتري در شرايط بي هوازي رشد داده شد سپس DNA کروموزومي به روش قليايي استخراج گرديد. پس از بررسي ترادف ژن مربوطه و طراحي پرايمر، قطعه مورد نظر از طريق واکنشهاي زنجيره اي پليمرازي (PCR) به وسيله آناليز آنزيمي ارزيابي شد و بر روي سه ناقل مختلف بياني pET28a, pRSET A و pET32a همسانه سازي گرديد. پروتئين توليد شده به وسيله SDS-PAGE بررسي شد و صحت محصول با روش وسترن بلاتينگ و واکنش اليزا مورد تاييد نهايي قرار گرفت و سپس به وسيله کروماتوگرافي ميل ترکيبي خالص سازي شد.
بحث و نتيجه: در اين تحقيق بالاترين بيان در شرايط غلظت 0.5 ميلي مولار IPTG، جذب نوري 0.6 و زمان القا 15 ساعت در دماي 30˚c به دست آمد. هر چند بيان ژنهايي که درصد بالايي از AT را برخوردارند در سيستم E.coli ضعيف است اما با اين حال بيان مناسبي از اين ژن به دست آمد. تخليص پروتئين نوترکيب در مراحل اوليه به دليل اتصال ضعيف نشان هيستيدين به ستون دشوار بود که ما با تغيير در روشها توانستيم اين پروتئين را تا 90% خالص سازي کنيم.

 
کلید واژه: 

 
موضوعات مرتبط: 
 
ارجاعات: 
 
 
مقالات نشریه ای مرتبط: 
 
مقالات همایشی مرتبط: 
 

  چکیده انگلیسی بازدید یکساله 111
 
 
آخرین های بلاگ
ورود به بلاگ مرکز اطلاعات علمی