برای اطلاع از آخرین مقالات علمی و اخبار کرونا(COVID-19) کلیک کنید

مشخصات مقاله

عنوان نشریه: 
 
اطلاعات شماره: 
 
عنوان مقاله: 

تخليص و تعيين خصوصيات اينترلوكين 4 نوتركيب و آنتي بادي ضداينترلوكين 4 به ترتيب از رده سلولي CHO انتقال يافته با ژن اينترلوكين 4 و هيبريدوماي ترشح كننده آنتي بادي ضد آن

 
نویسندگان: 
 
آدرس:  
 
چکیده: 

اينترلوكين4  (IL-4)سايتوكايني با فعاليت پلئوتروپيك بوده و عمدتا توسط لنفوسيتهاي T كمك كننده (T helper lymphocyte) سنتز ميشود. از جمله مهمترين اثرات آن بر سلولهاي مختلف ميتوان از القاي لنفوسيتهاي B انسان در جهت توليد  IgEو IgG4 و افزايش مولكولهاي سطحي سلول از جمله MHC بر روي لنفوسيتهاي B و ماكروفاژها نام برد كه اين پديده منجربه افزايش ظرفيت عرضه آنتي ژن در آنها مي شود. IL-4 همچنين به عنوان يك فاكتور رشد لنفوسيتهاي T به تنهايي و يا با ديگر ستيوكاين ها مانند IL-2 در رشد و نگهداري رده هاي سلولهاي لنفوسيتي T در كشت سلولي كاربرد قابل توجهي دارد. منبع تهيه اوليه اين سايتوكاين لنفوسيتهاي T تحريك شده ميباشد. تحقيقات متعددي در مورد استخراج ژن IL-4 و بيانcDNA در سيستمهاي بيان ژني مختلفي از قبيل E.coli، مخمر و اخيرا سلول پستانداران انجام پذيرفته است و در نتيجه با تكثير هر كدام از اين سيستمهاي بيان ميتوان سايتوكاين نوتركيب مورد نظر را به دست آورد. استخراج و تعيين مشخصات اينترلوكين 4 انساني توتركيب كه در رده سلولي CHO بيان شده باشد، تا كنون گزارش نشده است. لذا در اين تحقيق سعي شده تا با استفاده از سلول پستانداران (CHO) حاوي ژن IL-4 (به عنوان سيستم بيان) و رشد آن در in vitro،  IL-4انساني نوتركيب و تهيه و پس از خالص سازي، تعيين خصوصيت گردد. سيستم بيان مورد استفاده در اين مطالعه، سلول تخمدان هامستر چيني (Chines Hamster) بود كه با استفاده از cDNA ژن hIL-4 به داخل آن ترانسفكت شده بود. همچنين براي تهيه آنتي بادي نيز از سلول هيبريدوماي ترشح كننده آنتي بادي ضد IL-4 استفاده شد. پس از كشت اين سلولها، آنتي بادي ضد IL-4 از محلول رويي كشت هيبريدوما به وسيله پروتيين A خالص و به ژل فعال شده سفاروز متصل گرديد و ژل كروماتوگرافي ميل تركيبي ساخته شد. سپس كارآيي روش كروماتوگرافي ميل تركيبي براي جداسازي IL-4 نوتركيب از رويين كشت حاوي پروتيينهاي مختلف مورد ارزيابي قرار گرفت. از اين ستون كروماتوگرافي با ميل تركيبي و داراي ليگاند آنتي IL-4 جهت خالص سازي rhIL-4 استفاده شد. براي بررسي خلوص و شناسايي IL-4 نوتركيب به دست آمده از روش SDS-PAGE و وسترن بلاتينگ استفاده شد. در SDS-PAGE نمونه خالص شده باندي با وزن مولكولي حدود 27 كيلو دالتون را نشان داد. سپس با انتقال اين باند به كاغذ نيتروسلولز و با استفاده از آنتي بادي ضد IL-4 و كونژوگه Anti-mouose متصل به HRP آزمايش وسترن بلاتينگ انجام شد. اين آزمايش حضور rIL-4 در باند خالص شده را تاييد مي كند.

 
کلید واژه: 

 
موضوعات مرتبط: 
-
 
ارجاعات: 
  • ندارد
 
 
مقالات نشریه ای مرتبط: 
 
مقالات همایشی مرتبط: 
 

  چکیده انگلیسی بازدید یکساله 321
 
 
آخرین های بلاگ
ورود به بلاگ مرکز اطلاعات علمی